如何的進(jìn)行核酸提??？
更新時(shí)間：2019-06-11 點(diǎn)擊次數(shù)：3097次
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核酸提取的常見(jiàn)難點(diǎn)在于一些植物組織之所以比較難提取出高質(zhì)量的RNA與這些植物組織中富含的一些成份有關(guān)，常見(jiàn)的有酚類化合物，多糖以及某些尚無(wú)法確定的次級(jí)代謝產(chǎn)物，另外還有就是富含較高活性的組織。在完整的細(xì)胞內(nèi)，這些物質(zhì)與核酸是分離的，一旦細(xì)胞破碎，這些物質(zhì)就會(huì)與RNA相互作用。
核酸提取方法：
1. 迅速滅活內(nèi)源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3個(gè)方法均可有效使內(nèi)源RNA酶失活：
1）用含離液（如胍鹽）的細(xì)胞裂解液收獲樣品，并立即勻漿。
2）用液氮瞬間凍結(jié)樣品。值得特別注意的是：組織塊必須保證足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結(jié)，以確保瞬間令RNA酶失活。
3）立即將樣品置于無(wú)液氮RNA樣品儲(chǔ)存液中。它是一種水相、無(wú)毒的收集試劑，能立即穩(wěn)定并保護(hù)完整、未凍結(jié)的組織和細(xì)胞樣品中的RNA。關(guān)鍵要點(diǎn)是組織樣品切片一定要夠?。?lt;0.5 cm），這樣才能在RNase破壞RNA之前迅速滲入組織塊中。
2. 使用正確的細(xì)胞或組織儲(chǔ)存條件
在樣品用液氮瞬間凍結(jié)之后，應(yīng)該儲(chǔ)存在-80°C，千萬(wàn)不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍，也會(huì)導(dǎo)致RNA的降解和損失。瞬間凍結(jié)的組織應(yīng)該先在超低溫條件下先研磨成粉，然后置于裂解液中進(jìn)行勻漿。
4. 選擇好的RNA分離方法
現(xiàn)有眾多的RNA分離方法也許令人難以取舍。目前簡(jiǎn)單也是安全的方法是柱式分離，如因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，時(shí)間短，純度高而受到大家的喜愛(ài)，不需要DNA酶消化DNA，節(jié)省了時(shí)間，避免RNA的降解，從而提高了核酸提取產(chǎn)量；相對(duì)非柱式分離，去除蛋白及其他雜質(zhì)干凈，提高了純度，對(duì)于細(xì)胞、組織、一般植物均非常適合。植物核酸提取比較難抉擇，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質(zhì)、次生代謝物含量的影響，可以選擇多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（水仙、辣椒、胡蘿卜、玉米、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取試劑盒（適合絕大多數(shù)植物提取，包括：蘋果、葡萄、草莓、香蕉、龍眼、荔枝、草坪植物、松樹(shù)、杉樹(shù)、白樺、紫松果、彩葉草、一品紅、夾竹桃、垂葉榕、紫羅蘭、月季、天竺藍(lán)、牽?；ǖ龋?；非常值得一提的是血液（包括血清、血漿、腦脊液、其他液體）核酸提取用TRIZOL和紅細(xì)胞裂解的方法效果都不好，紅細(xì)胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分，這個(gè)過(guò)程RNA很容易降解，推薦使用血液總RNA提取試劑盒。
